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检测前 水样预处理相关
1.含有余氯水样在进行大肠菌群指标检测前是否需要进行预处理？
答：需要。
余氯包括游离性余氯和化合性余氯。游离性余氯（HClO、ClO⁻、Cl₂）与化合性余氯（NH₂Cl、NHCl₂）能快速破坏细菌的细胞壁、细胞膜，氧化细菌内部的酶和遗传物质，导致细菌死亡。如果对含余氯水样不进行预处理，水样中的大肠菌群可能部分被杀灭、导致检测结果偏低。
表1 余氯预处理相关标准
针对含余氯水样，可选用泰林无菌取水袋或无菌取样瓶，两类产品均按照 GB/T 5750.2-2023《生活饮用水标准检验方法 第 2 部分：水样的采集与保存》的相关要求添加硫代硫酸钠，可有效去除水样中的余氯。若使用泰林未添加硫代硫酸钠的无菌取水袋、无菌取样瓶，建议对含余氯水样先行预处理。
2.重金属离子含量高的水样为什么要进行预处理？
重金属离子会改变酶底物试剂体系的离子强度与pH值，直接抑制目标微生物体内酶的活性，导致其无法与酶底物充分反应。部分重金属离子与显色剂或反应产物结合，产生沉淀影响判读，造成检测结果偏低。
根据HJ 1001-2018《水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法》与HJ 347.2-2018《水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法》规定：如果采集的是重金属离子含量高的水样，应在每100mL水样中添加0.036g乙二胺四乙酸二钠。
小贴士
环境水样中北方地区干旱降雨少，且广泛分布石灰岩、白云岩、富钙黄土等，矿物质易被水溶解，导致水样中重金属离子含量偏高。南方地区湿润多雨，且主要分布火成岩（花岗岩等）、变质岩等，矿物质不易溶解，水体重金属离子含量偏低。
地下水因漫长渗透过程，能够充分溶解地层（如石灰岩、石膏）中的金属离子，地下水的重金属含量普遍高于地表水。
泰林酶底物法大肠菌群检测试剂复配多种成分，能够缓冲重金属离子的冲击，各组分与重金属离子不会发生理化反应。经质控菌株与水样检测验证，使用泰林的耗材与酶底物法大肠菌群检测试剂，不需对重金属离子含量高的水样额外进行预处理。
检测中 实验过程与培养相关
1.酶底物法大肠菌群检测出现浅色孔的原因、处理方法与检测结果判读？
答：酶底物法大肠菌群检测出现浅色孔的原因有：
1）水体中的部分大肠菌群自身生长慢、产酶少。
2）环境压力造成部分大肠菌群菌体处于损伤状态。
根据GB/T 5750.12-2023 《生活饮用水标准检验方法 第12部分：微生物指标》总大肠菌群检测酶底物法规定：如果结果为可疑阳性，可延长培养时间到28h进行结果判读。
培养时间小于 24h出现的阳性结果视作有效，培养时间高于28h的阴性结果也视为有效。
24-28h内出现的结果变化以 28h最终结果为有效结果，28h后出现的结果变化均视为无效。
2. 酶底物法大肠菌群检测出现可疑阳性孔、为什么可以延长培养时间至28h观察结果？
答：延长培养时间至28h，是对24h可疑阳性结果的补充确认。如果24h已出现明确阳性，则不需延长培养。只有存在难以辨认的可疑阳性结果，需延长培养时间至28h。
对大肠菌群：28h是一个经过验证的、能充分促进绝大多数受到环境压力而菌体损伤的大肠菌群恢复的窗口期。
对于非大肠菌群：28h是一个安全边界，可以确保抑菌成分的有效性，最大限度地防止非大肠菌群的生长，从而保证方法的高特异性。
3. 为什么粪大肠菌群检测时，定量盘中会出现渐变黄色？
答：因为培养箱加热方式、定量盘摆放与堆叠方式造成定量盘受热不均，影响粪大肠菌群的生长。
定量盘摆放与堆叠方式造成箱体内热传递更慢，热分布更不均匀。粪大肠菌群作为温度敏感型细菌，在温度低的一侧生长产酶变色，在温度高的一侧（如超出了44.5 ± 0.5℃的上限），生长被抑制，出现如下图所示的渐变色。
当定量盘出现渐变黄色，应立刻依据GB/T 10592-2023 《高低温试验箱技术条件》与GB/T 28851-2012 《生化培养箱技术条件》相关标准进行培养箱温度验证。根据验证结果，采用JJF 1101-2019 《环境试验设备温度、湿度参数校准规范》与《培养箱使用说明书》进行温度调节。保证培养温度符合检测条件。
建议粪大肠菌群检测时，使用隔水式培养箱，定期进行温度验证，将定量盘置于培养箱中央，且定量盘堆叠不超过5个，每叠定量盘之间至少间隔5cm。
检测后 废弃物处理相关
1. 酶底物法微生物检测培养后的定量盘如何处理？
答：培养后的定量盘经121℃、高压蒸汽灭菌20min后，作为一般废弃物处理。
1）培养后的定量盘置于专用的废弃物容器内，集中存放在指定地点。
2）培养后的定量盘每20个放入双层生物安全灭菌袋中，袋口打结。
3）放入灭菌锅经121℃、高压蒸汽灭菌20min处理后，作为一般废弃物处理。
集中存放→双层生物安全灭菌袋→121°C、高压蒸汽灭菌20min
依据GB 19489-2008 《实验室生物安全通用要求》；SN/T 4835-2017 《实验室生物废弃物管理要求》；HJ 1001-2018 《水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法》相关规定。